福流生物
NanoPC & 膜通透剂，内腔蛋白表征一站式方案！
Author: Mika Huang Date: December 20, 2023
对于每一位科研人来讲，想要对自己研究的生物纳米颗粒做到了如指掌，必然少不了在组成结构方面由内到外的综合表征。在之前的推文中，小编为大家展示了如何基于纳米流式检测平台实现外泌体、慢病毒(lentivirus, LV)等生物纳米颗粒表面的蛋白或脂质大分子的表征。具体参见往期文章：
02 外泌体纯不纯，一闻就知
今天小编将和大家进一步讨论如何实现外泌体、慢病毒的内腔蛋白表征，如外泌体内腔蛋白Syntenin-1、慢病毒的衣壳蛋白p24及其与核酸的共定位分析。我们联合使用了NanoPC多功能纯化柱(Cat.NP-23021-20) + 膜通透剂(Cat.P2320)，其中膜通透剂辅助抗体孵育即可实现腔内靶标蛋白的标记，之后结合NanoPC有效去除游离抗体，整个过程在2小时之内即可完成，操作简单，省时省力。关于我们的明星产品——NanoPC多功能纯化柱，参见往期文章：买一送一|NanoPC纯化柱新品上市。
我们直接展示数据，上干货
Syntenin-1蛋白是外泌体的经典内腔蛋白且被认为密切参与外泌体的生物生成途径。在膜通透剂处理样本后，抗体可自由穿过磷脂双分子膜，随后经NanoPC过柱处理，轻松实现单个外泌体中Sytenin-1蛋白的标记分析。如图1所示，该样本中约31.1%的外泌体展示出Sytenin-1蛋白阳性。
图1. 外泌体内腔蛋白Syntenin-1的检测分析
p24蛋白是LV的衣壳蛋白，是LV病毒组成的重要结构蛋白，但因为慢病毒外部荚膜层的阻隔，抗体难以进入衣壳内部，p24衣壳蛋白的标记也就成为一大难题。可喜的是，NanoPC+膜通透剂的方案同样适用于p24蛋白的标记。结果显示，该LV样本中仅有约50%的颗粒可以被p24衣壳蛋白抗体标记，且衣壳蛋白阳性颗粒的粒径分布与LV的粒径分布完美匹配（图2）。
图2. LV衣壳蛋白p24的检测分析
结合核酸染料标记，可以进一步实现LV样本p24与核酸的共定位分析。如图3所示，p24和核酸双阳性的颗粒占比为42.4%，但分别存在10.2%和31.3%的颗粒表现为p24或者核酸单阳性。
图3. LV衣壳蛋白p24与核酸的双标记分析
我们坚信这一针对生物纳米颗粒内腔蛋白表征的一站式方案(膜通透剂 + NanoPC)，将带您揭示生物纳米颗粒不同层次的微观信息，也希望这一方案为您的实验保驾护航，让您科研更上一层楼！
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