蛋白质分析

Author: Mika Huang Date: February 14, 2023

目前，学术界对外泌体的起源还没有一个清晰的定论，许多研究者认为外泌体是在多泡体融合细胞膜时形成的。然而，许多研究方法分离出来的颗粒是细胞外囊泡的混合物。EVs的研究领域还不够成熟，尚没有发现能把EVs的某种亚群与其它成分区分开的特异性的标志物，比如鉴别细胞膜直接分泌的和多泡体融合细胞膜分泌的EVs。早期的研究认为CD9、CD81和CD63是外泌体的特征标志物，随着研究的深入，现在已经很清晰这些跨膜蛋白不能代表外泌体的特征标志物，但是它们在外泌体中存在过表达的现象。国际细胞外囊泡协会（International Society for Extracellular Vesicles, ISEV）认为CD9、CD81和CD63等这些标志物，可以用于区分EVs和非EVs的颗粒。

这里分别以CD9和CD63为例，考察在EVs中过表达的蛋白质。通过病毒转染和药物筛选得到稳定表达CD63-EGFP的HEK细胞系，该细胞系分泌的外泌体的CD63上会稳定表达EGFP标签，利用纳米流式检测仪对单颗粒CD63-EGFP EVs进行分析，可以得到自带荧光标签的EVs的比例和颗粒浓度等信息。通过免疫荧光标记使EVs的CD9蛋白带上荧光标签，利用纳米流式检测仪对单颗粒CD9-AF488 EVs进行分析，可以得到免疫荧光标记的EVs的比例和颗粒浓度等信息。

图1. 纳米流式检测仪对自带荧光蛋白的EVs（CD63-EGFP EVs）的多参数分析

图2. 纳米流式检测仪对免疫荧光标记的EVs（Anti-CD9-AF488 EVs）的多参数分析

纳米流式检测仪对EVs表面低至单个拷贝蛋白标志物的分析方法，可以扩展到其它低拷贝的功能性蛋白质。